Se optimizó la producción de un surfactante bacteriano por medio de la Metodología de Superficie de Respuesta (MSR), como variables de estudio para incrementar la eficiencia de biosíntesis del biosurfactante se evaluaron las concentracines de carbono y nitrógeno, así como la adición de un sustrato insoluble. La fuente de nitrógeno fue una mezcla de extracto de levadura- NaNO₃ y como fuente de carbono se usó fructosa. Bajo las condiciones ensayadas la relación extracto de levadura- NaNO₃ y la concentración de hexadecano fueron los factores que tuvieron un efecto significativo en la producción del biosurfactante a nivel matraz. Por medio del análisis canónico se estimaron las condiciones óptimas de la superficie de respuesta, que fueron usadas en un biorreactor de 600 mL, en el cual se obtuvo una producción de biosurfactante de 74.23% medido por el índice de emulsificación, cuyo valor fue similar al estimado por el modelo cuadrático.